0

Master's Thesis I: Function-Analysis of Seventeen Function-Unknown Genes in Bacillus Subtilis

eBook

Erschienen am 26.07.2013, Auflage: 1/2013
CHF 48,70
(inkl. MwSt.)

Download

E-Book Download
Bibliografische Daten
ISBN/EAN: 9783656467823
Umfang: 156 S., 17.67 MB
E-Book
Format: PDF
DRM: Nicht vorhanden

Beschreibung

Dette project handlede om en sekvens på 22,62 kb, som indeholder 17 nyligt sekventeret gener i Bacillus subtilis, h.h.v. yut M, yut K, yut J, yut I, yut H, yut G, yut F, yut E, yut D, yut C, yunA, yun B, yunC, yunC, yunE, yunF, og yunG. Formålet med projektet var først at mutagenisere disse ukendte gener, som skulle dernæst analyseres og sammenlignes med vildtypen. Mutationerne blev udført ved at indføre plasmidet pMUTIN4 efter en standardiserede metode udviklet for B. Subtilis Genomprojektet. Der blev konstrueret over 56 stammer med defekter i 15 af de aktuelle gener. Stammerne indeholdte lacZ i starten af generne, hvilket muliggjorde at undersøge, hvornår generne blev udtrykt, ved blandt andet udpladning på LB-plader med og uden IPTG. Mutant stammerne blev dernæst ved en southern blot analyse undersøgt for, om de havde en eller flere kopier af plasmidet inkorporeret på kromosomalt DNA. Southern blottet indikerede, at inkorporeringen af plasmidet var som ønsket (en kopi) i 14 mutant stammer, imens der var en mutant stamme af yutJ med tandem insert. Derudover de gentagne mislykkede transformations forsøg (10 forsøg) for yunA og yunG understregede at disse to gener var essentielle for overlevelse. Homologisøgningen viste, at nogle af de 17 gener var stædigvæk ukendte såsom yutD, yutC, yunB, yunC,yunF og yunG, hvorimod nolge af dem havde analogi med nogle allerede karakteriserede gener enten fra B. subtil eller fra andre organismer. Fænotypisk ekspressions undersøgelser viste, at ligesom yutE, yutD og yutF, generne yunB, yunC, yunD, yunE, yunF, og yunG var organiseret i en operon. Imodsætning til yutF stammen, yutG stammen og yutD stammen var en smule underlagt glucose repression. Desuden, hverken yutH stamen eller yutC stammen blev induceret hverken ved vækst på plader med glucose eller succinate. Ydermere de 3 konstruerede yutK stammer blev renstøget på minimal medie plader med en række deoxyriboser samt deoxyribose med og uden inosine, for at undersøge, om yutK genet er underlagt DeoR kontrol eller induceres af deoxyriboser. Resultaterne viste, at yutK genet ikke var underlagt DeoR kontrol. Resultaterne af væksforsøg og ensymassagys for yutK stammen viste, at stammen havde 6 fold lavere beta-galactosidaseaktivitet fra eksponentiel til stationær fase, når den voksede på flydende LB medie, imens den havde 1,5 fold lavere beta-galactosidaseaktivitet fra eksponentiel til stationær fase, når den voksede på flydende minimal medie med glucose.

Informationen zu E-Books

Individuelle Erläuterung zu E-Books