Inhaltsangabe:Zusammenfassung:Bei dem hypotrichen Ciliaten E.crassus wurde das Makronukleus-Chromosom, welches das HSP7O-Gen trägt, identifiziert. Für die Identifikation eines internen Gen-Fragmentes wurde die Methode der heterologen PCR angewendet. Die 5'- und 3'-Enden des Gens konnten mit einem telomerspezifischen Primer und mit homologen Primern, die aus dem internen PCR-Fragment abgeleitet wurden, amplifiziert werden. Nach Sequenzierung der PCR-Fragmente und einem Vergleich der abgeleiteten Aminosäuresequenzen mit Aminosäuresequenzen aus weiteren Organismen wurde eine Homologie von bis zu 95 % festgestellt.Untersuchungen zur Kopienzahl zeigten, daß im Makronukleus das HSP7O-Gen in einer Kopienzahl von 2000-2500 Kopien vorlag. Dies entsprach der durchschnittlichen Kopienzaht von E.crassus.Um Promotor-Elemente zu identifizieren, wurde der Transkriptionsstartpunkt bestimmt. Eine Analyse der 5'-nicht kodierten Region zeigte, daß keine Sequenzhomologie zu den bekannten core-Promotor-Elementen TATA-Box und Initiator-Element bestand. Durch Sequenzvergleiche mit der bekannten Konsensussequenz der Hitze-Schock-Elemente wurden jedoch zwei Hitze-Schock-Elemente identifiziert.Weitere Untersuchungen zur Expression des HSP7O-Gens nach Hitzeschock und ohne Hitzeschock erfolgten sowohl auf der Ebene der RNA als auch auf der Protein-Ebene. Durch eine Northern-Blot-Analyse wurde eine erhöhte Transkripmenge der HSP70-mRNA in hitzeinduzierten Ciliaten festgestellt. Auf der Protein-Ebene zeigte sich jedoch kein quantitativer Unterschied zwischen hitzeinduzierten und nicht hitzeinduzierten Zellen.Inhaltsverzeichnis:Inhaltsverzeichnis:1.ZUSAMMENFASSUNG12.EINLEITUNG22.1Die Genomorganisation des hypotrichen Ciliat Euplotes crassus22.2Konjugation und Makronukleusentwicklung bei Euplotes crassus42.3Transk:riptinelle Regulation der Genexpression52.4Transkriptionelle Regulation der Genexpression am Beispiel der Hitzeschockgene72.5Ziel der Arbeit83.MATERIAL93.1Chemikalien93.2Radioisotope103.3Verbrauchsmaterialien103.4Geräte113.5Enzyme123.6Primer123.7Organismen143.8Plasmide und Gene144.METHODEN154.1Kultivierung154.1.1Kultivierung von Dunaliella tertiolecta154.1.2Kultivierung von Euplotes crassus154.1.3Kultivierung von Escherichia coli164.2Herstellung RNase-freier Geräte und Lösungen164.2.1Geräte und Allgemeines164.2.2Lösungen164.3Reinigung und Konzentrationsbestimmung von []